補體旁路途徑溶血活性的測

原理

兔紅細胞不經致敏可激活人補體旁路途徑，導致兔紅細胞溶解。在反應系統中加入乙二醇雙氨基四乙酸（ethyleneglycol-bis- aminotetracetate，EGTA）可和血漿Ca2+螯合，EGTA與Mg2+結合能力很弱，故經典途徑被封閉。根據兔紅細胞的溶血程度，可測定補體旁路途徑的總補體活性。

2、所需主要試劑

（1）兔紅細胞（rabbitredbloodcell，RRBC）懸液的制備 無菌采兔耳靜脈或心臟血，用阿氏液抗凝，分裝，4℃保存。可用1周左右。試驗時取一定量的RRBC，用EGTA-GVD2應用緩沖液洗滌3次，并用該緩沖液配制成3×108個/mL細胞懸液；

（2）0.1mol/LEGTA-M溶液 EGTA 38.00g，MgCh·6f102 0.30g，NaOH約7.00g，溶于蒸餾水中，以1mol/LNaOH調節至pH7.5，加蒸餾水至1000mL；

（3）0.03mol/LEGTA-GVB2 0.1mol/LEGTA-M 300ral，0.1mol/LCaCl2 5mL，巴比妥緩沖液（5X，NaCl 85g，巴比妥酸5.75g，巴比妥鈉3.75g，蒸餾水1500mL）180mL，2%明膠50mL，加蒸餾水至幾，調節至pH7.5；

（4）0.1mol/L乙二胺四乙酸三鈉原液（EDTA-Na3） EDTA-Na3 37.23g，NaOH 4.00g。分別將EDTA-Na3溶于500mL蒸餾水中，NaOH溶于100mL蒸餾水中，將NaOH溶液加入EDTA-Na3溶液中混合，用 1mol/LNaOH調節至pH7.5，加蒸餾水至1L；

（5）0.01mol/LEGTA-GVB2應用緩沖液 巴比妥緩沖液原液（5X）360mL，0.1mol/LEDTA-Na3原液200ral，2%明膠溶液l00mL，蒸餾水加至2L。

3、方法

在各試管中加人反應物，37℃水浴40min后，加入應用緩沖液6.3mL，3000r/rain離心10rain，取上清，在分光光度計上讀取 OD452nm值，然后計算每毫升血清樣本ACH50單位（方法同CH50測定 http://shiyan.ebioe.com/SRBCCH50.htm）。

正常值為18.9±2.2（X±1SD）U/ml。