有兩類血氨測定方法。一類為兩步法,先從全血中分離出氨,再進行測定,如擴散法(已淘汰)和離子交換樹脂法;另一類為一步法,不需從全血中分離出氨直接測定,如酶法和離子選擇電極法。
(1)直接顯色測定法:在床旁取靜脈血2ml,以鎢酸沉淀蛋白后,用酚-——次氯酸鹽顯色,參照標準計算氨含量。如嚴格掌握實驗條件,本法分析結果能滿足臨床要求。
(2)谷氨酸脫氫酶速率法:血漿中的氨在足量的α-酮戊二酸和NADPH存在時,經谷氨酸脫氫酶作用生成谷氨酸,并消耗NADPH,NADPH的下降速率與血漿氨濃度成正比。
(3)離子交換法:去蛋白血漿標本中的氨先被陽離子交換樹脂吸附,再被分離出來,用酚——次氯酸鹽顯色反應求出氨含量。本法特異性好,精密度和準確度均較高,已被作為血氨測定的參考方法。
(4)氨電極法:氨氣敏電極選擇性較高,故這類方法特異性好、準確度較高,但是耐用性差,而且電極穩定性受溫度、滲透壓、中介液等多種因素影響。
血氨測定的準確性在很大程度上取決于標本的留取和收集,血氨測定應用抗凝血而不能用血清做標本,因為在血凝過程中會產生氨,且抗凝劑一般用肝素。紅細胞內氨的含量較血漿中高2.8倍,故溶血標本或者血液標本久置都會使血漿氨的含量急劇增高。血液標本放入試管中要加蓋,低溫離心5分鐘,迅速取出血漿進行測定,并且要在30分鐘內完成,如果不能及時檢測,應將標本放于2-8度冰箱,最多放置3小時。分析過程中如果受到氨的污染也會導致血氨測定值假性增高。最后,不同儀器不同實驗方法分析得到的結果也會有很大差異。