蛋白質的復性

　　蛋白質的復性

　　蛋白質復性的最大問題，是在復性過程中形成中間體和多聚體，中間體阻礙作用大的使蛋白質正確折疊困難，復性就困難；阻礙小或無阻礙的容易復性。降低蛋白濃度可以減少中間體形成提高復性率。減少中間體的形成，可選用添加小分子物質，又叫分子伴侶，如精氨酸、甘油、PEG等小分子物質幫助蛋白質正確折疊。避免多聚體的形成入氧化還原劑（DTT、szlig；－ME、還原型谷胱甘肽、氧化型谷胱甘肽、Cu2＋等），幫助蛋白質復性中二硫鍵的正確配對，減少錯配率。

　　復性緩沖液的pH要遠離等電點，離子強度不易過高，10－50mmol/L，離子強度太高蛋白質易發生沉淀，也不利于離子交換層析的分離；復性液溫度不易過高在4℃－10℃較合適對于耐熱蛋白也可以室溫復性。復性時間，以天然表達的重組蛋白復性應在6hr以上，需要進行酶切的融和表達重組蛋白，至少要復性1hr以上，方可進行進一步的酶切。

　　復性方式：常用的有透析復性和稀釋復性。透析復性適用于小樣品制備；對于大樣品制備，采用稀釋復性法簡便、實用。一般包含體蛋白的復性濃度不易過大，不同的蛋白質有所區別，一般掌握在100－200ug/ml較合適，蛋白濃度太稀使純化流程過長，蛋白濃度太濃，蛋白質復性不完全，會直接影響蛋白的回收率。直接稀釋有困難的，也可以試用分段稀釋法。

　　蛋白質的復性是重組蛋白純化中最關鍵和最復雜的問題。蛋白質的性質不同，所處的環境不同，使其復性條件大不相同。任何一個蛋白質都有一個最佳的復性條件，這個最佳條件的選擇是靠大量的實驗來完成的。只有選擇到了合適的復性緩沖液，使蛋白得以正確折疊，才能使進一步的層析分離得以順利完成。