蛋白質印跡實驗

甘氨酸 Tris SDS 甲醇

1. 溶液配置

(1) 連續緩沖系統

甘氨酸 39 mmol/L；Tris 48 mmol/L；SDS 0.0375% ( W/V)；甲醇 20% (V/V)。溶液均需用雙蒸水配置。這個緩沖系統可用作陽極緩沖液，也可用作陰極緩沖液。

(2) 不連續緩沖系統

陽極緩沖液Ⅰ：0.3 mol/L Tris，pH 10.4，20% 甲醇。

陽極緩沖液Ⅱ：25 mmoI/L Tris，pH 10.4，20% 甲醇。

陰極緩沖液：4 mmol/L 6-氨基-n-己酸，pH 7.6，20% 甲醇。

緩沖液中的甲醇可以防止 SDS 凝膠的腫脹，但由于它的固定作用可能使蛋白質變性，結果導致轉移效率降低。反之，甲醇由于增強疏水反應可能增加蛋白與硝化纖維素膜的結合能力。

2. 轉移單元的組成

先將凝膠從支持膜上剝離下來，如圖 11.6 組成轉移單元。如使用連續緩沖系統，陽、陰極側濾紙使用相同緩沖液。如使用不連續緩沖系統，第一層的 6 張濾紙用陽極液Ⅰ浸濕并放在陽極板上。如有多個轉移單元時，第一層的 3 張濾紙用陽極液Ⅱ浸濕，每個單元的最后 3 張濾紙和鄰近陰極板的 6 張濾紙用陰極液浸濕。操作時應帶手套。每層之間要避免氣泡。為了確保電流僅僅通過凝膠，要使所有轉移單元的組成都與被轉移的凝膠有同樣的大小。相同形式和大小的幾塊凝膠能同時把一個單元堆在另一個單元上進行轉移。可同時轉移的單元數取決于儀器的性能。在單元之間要放一張玻璃紙透析膜，以防止轉移單元之間的交叉污染。



3. 電參數

轉移時的電流為 0.8 mA/cm²。SDS 凝膠轉移所需的時間約為 0.5~1 小時。取決于固定化材料和緩沖液的選擇，儀器的性能等。

本實驗來源「蛋白質電泳實驗技術」主編：郭堯君。