1. 將藻酸鈉溶于無菌生理鹽水,終濃度為1.5%;
2. 收集培養的腫瘤細胞,用無血清的培養基洗滌1次,將細胞沉淀重懸于1.5%藻酸鈉溶液中;
3. 將上述腫瘤細胞懸浮液用1 ml加樣槍緩慢滴入磁力攪拌的250 mM CaCl2溶液中,形成乳白色的藻酸鹽小珠。繼續靜置于250 mM CaCl2中30 min即可使用。以上操作步驟均在無菌條件下進行;
4. 將第4次免疫后7天的小鼠用苯巴比妥鈉0.1ml (按100 mg/kg計) 腹腔注射麻醉,小鼠麻醉后置于解剖臺上,切開背部皮膚,皮下植入4粒藻酸鹽包裹顆粒,縫合皮膚,外敷手術膠膜;
5. 天以后,小鼠經尾靜脈注入100 μl (按100 mg/kg計) FITC標記的葡聚糖(FITC-Dextran);
6. 20 min后處死動物,取出藻酸鹽顆粒,常溫下加入1 ml的生理鹽水,剪碎研磨顆粒,再加入1 ml的生理鹽水,混勻標本,放置1小時,1500 rpm離心5 min。取上清液用熒光酶標儀測定;
7. 用不同濃度的FITC-Dextran制備標準曲線。