熒光分析的原理

使激發光的波長和強度保持不變，而讓熒光物質所發生的熒光通過發射單色器照射于檢測器上,調節發射單色器至各種不同波長處,由檢測器測出相應的熒光強度，然后以熒光波長為橫坐標，以熒光強度為縱坐標作圖，即為熒光光譜，又稱熒光發射光譜。讓不同波長的激發光激發熒光物質使之發生熒光，而讓熒光以固定的發射波長照射到檢測器上，然后以激發光波長為橫坐標，以熒光強度為縱坐標，所繪制的圖即為熒光激發光譜，又稱激發光譜。 　紫外－可見光區熒光的產生，是由第一電子激發態的最低振動能級躍遷至電子基態的各個不同振動能級所致，而與熒光物質分子被激發至哪一個能級無關。因此，熒光光譜的形狀與激發光的波長無關。
物質的吸收光譜的第一吸收帶的形狀，決定于第一激發態的各個振動能級的分布情況。躍遷的兩個能級之間的差距越大，吸收峰波長越短。熒光光譜的形狀決定于電子基態振動能級的分布情況。電子基態的振動能級越高，兩個能級之間的差距越小，則熒光峰的波長越長。電子基態和第一電子激發態中能級的分布情況是相類似的，所以，熒光光譜和吸收光譜的形狀相似，但卻呈鏡像對稱關系。
溶液的熒光強度與該溶液的吸光強度及熒光物質的熒光效率有關。對于某一熒光物質的稀溶液而言,每一平方厘米的截面上的熒光強度F可用下式表示： 式中φ為熒光物質的熒光效率;I0為每秒鐘每平方厘米上入射光的強度；ε為熒光物質的摩爾吸光系數；c為熒光物質的濃度；l為樣品池的厚度。由上式可見,在入射光強度與液池厚度不變的條件下，某一熒光物質的稀溶液(εcl≤0.05)的熒光強度與該物質的濃度成正比。
溶液的熒光強度還受到溶劑、溶液溫度和pH值的影響。溶液的熒光強度還會因熒光物質分子與溶劑分子或其他溶質分子的相互作用而降低，這種現象稱為熒光猝滅。