膠體金標記的全定量免疫層析技術的原理

從定性、半定量向全定量是即時檢驗（POCT）技術發展的一個趨勢。全定量的POCT檢測技術有多種原理。本文主要介紹膠體金標記的全定量免疫層析技術的原理。

一、膠體金標記的全定量免疫層析POCT試劑裝置結構示意圖及作用

1、    吸收墊：吸收多余液體。

2、    PVC底板：提供試劑封裝外殼。

3、    C1、C2：標準質控區。羊抗鼠抗體結合于硝酸纖維膜上。

4、    T：檢測區。鼠源性單克隆二抗。

5、    硝酸纖維素膜：提供抗原抗體反應的固相載體。

6、    膠體金墊：含膠體金標記的鼠源性單克隆抗體。

7、    樣品吸收墊：吸收樣品液體。

二、原理

該方法的免疫學原理是一個雙抗體夾心法。

樣品加入樣品吸收墊，樣品中的液體首先溶解膠體金墊中含有的膠體金標記的鼠源性單克隆抗體。其次樣品中待測抗原與膠體金顆粒標記的鼠源性單克隆抗體結合，形成抗原-抗體*膠體金復合物，并靠毛細作用向檢測線移動。在硝酸纖維薄膜的檢測線上固定有另一鼠源性單克隆二抗。當樣品層析至檢測線時，可以進一步形成抗體-抗原-抗體*膠體金雙抗體夾心復合物，并在檢測線上聚積顯現出一條可見的顯色反應。無顯色反應則表示樣品中無抗原存在。而膠體金的量反應了待測抗原的量。從加樣墊中泳動過來的過量膠體金標記的單克隆抗體是鼠源性的，無論攜帶抗原與否，均可被固定于標準的羊抗鼠抗體所捕獲，形成顯色反應，這種顯色反應，既代表了整個反應體系是正確的，同時C1、C2區的顯色反應的深淺，與檢測區中被測抗原的量呈對應關系。膠體金顆粒在特定波長下，對光的吸收和散射與膠體金顆粒的量相關，通過光電感應器檢測膠體金顆粒對光的吸收和散射，從而獲得待測抗原的量。

三、討論

    全定量是POCT的發展趨勢，采用兩點定標法是全定量的一個重要標志，只有兩點定標才有可能實現真正的全定量。