競爭性PCR 是靶基因與參考標準在同一反應管中共同擴增,用參
考標準作對照估計出一種特異性靶DNA或RNA分子的相對含量。
? 競爭PCR 有效地控制了不同反應管間擴增效率的差異。
競爭 PCR -理論基礎
在PCR擴增過程中,PCR產物的量用公式Y= A (1+R)n表示,其Y表示PCR產物的量,A表示初始 模板的量,R表示PCR的擴增效率,n表示PCR的循環 數,當PCR擴增效率相同時,PCR產物的量與初始模 板的量成正比。 — 相似的基因序列,同一引物,相同的引物結合位 點, 擴增效率一致。最終混合PCR產物中,待分析 樣本與競爭底物終產物的比值直觀地反映了兩者初 始狀態時核酸含量比值。
多重 + 競爭 PCR -優勢
a.通量高:每個反應孔內可同時檢測10個基因;
b.經濟:適合大樣本多個基因同時檢測,大大縮短了實驗周期,提高了
實驗效率。
c.檢測分辨度高:可有效分辨低至15%的表達量差異;
d.重復性好:在對已知濃度RNA進行遞增稀釋后,進行多重表達分析
線性關系好R2>0.99;
e.準確性高:目標/參照基因片段與內對照基因片段間序列基本一致
性, 保證終擴增產物真實反應初始模板量比,一個或多個參
照基因與檢測 基因在同一管內反應,每個基因的表達量都利
用競爭性PCR進行精確 測定。