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按照以下步驟用瓊脂培養液涂多孔培養板的孔：
(a)在錐形瓶中制備 3% 瓊脂儲存溶液（每100 ml D-PBSA 中加入 3 g 瓊脂）；
(b)在沸水中將燒瓶加熱直至瓊脂溶解。在沸水中放一個空錐形瓶，將 10 ml 熱瓊脂溶液注入此燒瓶中；
(c)向燒瓶內慢慢加入預溫的完全生長培養液，直至培養液在瓊脂內的濃度達到 0.75%；
(d)在多孔培養板的每個孔內加入 0.5 ml 溫培養液-瓊脂溶液；
(e)使瓊脂冷卻和膠化。
這些多孔培養板可在冷藏箱內儲存一周。
1. 在無菌條件下，從妊娠 17 d 或 18 d 胎鼠的同窩仔切出整個腦，然后將腦組織放入含 D-PBSA 的 10 cm Petri 培養皿中。
2. 用手術刀將組織切成約 0.5 cm3 小塊。
3. 將組織塊移入一個試管，用 D-PBSA 洗 3 次。每次清洗之間讓組織沉降至管底。
4. 向組織內加入 5 ml 胰蛋白酶溶液，在 37℃水浴箱中消化 5 min。
5. 用 Pasteur 吸管吹打約 20 次，將組織分散。
6. 讓組織沉降 3 min，然后將無組織塊的混著細胞懸液移入含 5 ml 生長培養液的試管內。
7. 向未分散的組織加入 5 ml 新鮮的胰蛋白酶溶液，重復消化和分散步驟 2 次以上。
8. 將細胞懸液離心（200 g ，5 min )。
9. 吸去上清液，用 10 ml 生長培養液混懸和收集細胞。
10. 計數細胞，在每個涂瓊脂的孔內加入 1 ml 細胞懸液（3x106 個細胞）。
11. 將多孔培養板放入 CO2 培養箱，培養 48 h 。
12. 將細胞聚集物移入無菌的 10 cm Petri培養皿中，并加入 10 ml 生長培養液。
13. 用 Pasteur 吸管將大的聚集物分別移到新的涂有瓊脂的多孔板。
14. 每 3 d 更換培養液 1 次。小心地吸去原有培養液，添加新鮮培養液，覆蓋聚集物。
在 20 d 培養過程中，細胞聚集物可變為球形，發育形成器官樣結構。
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