葡萄球菌的OF試驗應使用專用配方，不可與非發酵菌用的OF管混用。培養基用的指示劑必須用水配制，因為個別菌株能分解乙醇產酸。
培養基：
酵母浸膏 0.1g
胰胨 1g
牛肉浸液 l00ml
0.2％溴甲酚紫溶液 lml
校正pH7.0，按常規方法加入1％的碳水化合物，分裝，滅菌，備用。
溴甲酚紫的配制：溴甲酚紫lOOmg， 0.01mol的NaOH 18.5ml，加水至50ml。
方法：挑取待檢菌落，接種于2支O-F培養基管中，發酵管加滅菌液體石蠟油約 lcm深，氧化管不加。35℃孵育24h后觀察，培養基變黃即產酸。結果判定如下：
代謝型 加石蠟 不加石蠟
發酵 產酸 產酸
氧化 不變色 產酸