睪丸間質細胞（LCs）m6A修飾提供新治療靶點在不育癥治療方向的應用
文章導讀
m6A是真核生物中最常見的一類RNA修飾，目前已有的研究表明m6A在加速mRNA代謝和翻譯，以及在細胞分化、胚胎發育和壓力應答等過程中起重要作用。這一次，研究重大發現m6A修飾在“人類繁衍”中也發揮著重大意義，該方向的發現將會吸引著更多的科研工作者探究在m6A與“不孕不育”的密切聯系。云序生物一直關注m6A研究動態，今天為大家帶來的文章剛好揭示了m6A修飾調節睪丸間質細胞發育的過程。
2020年1月31日，m6A調節睪酮合成一文發表在Autophagy （IF=11.059）期刊上，該文章采用多組學聯合應用技術檢測睪丸間質細胞（LCs）m6A甲基化修飾，這項研究揭示m6A 甲基化在LCs中調節睪酮合成中的作用，通過利用m6A 甲基化研究作為無精子癥和少精子癥的治療靶點，為新的治療策略提供了方向。
發表期刊：Autophagy
影響因子：11.059
發表時間：20200131
實驗方法：MeRIP-seq, RNA-seq,CoIP, ChIP, RIP, MeRIP-qPCR等（云序生物提供此服務）
原文鏈接：m6A mRNA methylation regulates testosterone synthesis through modulating autophagy in Leydig cells
文章內容
1.自噬對LCs中睪酮的合成至關重要
本研究中作者檢測了LCs自噬標記物LC3B-II，發現LCs中LC3B-II在細胞分化過程中表達增加，并且在成年人LCs中達到峰值。此外LC3B-II在LCs從莖細胞向成體細胞分化過程中表達量增加，同時血清睪酮水平逐漸升高。進一步研究發現沉默ATG7后抑制HsCG誘導LC3B-II表達和睪酮分泌，表明LCs自噬介導睪酮合成。
圖1. LCs自噬介導睪酮合成
2.LCs的自噬依賴于AMPK信號通路
為了探究LCs自噬過程參與的信號通路，根據前期研究發現磷酸化AMPK亞基PRKAA2
Thr172是自噬過程中典型的啟動者，并且可以增加其下游蛋白p-ULK1
Ser555的表達，本次實驗中發現在LCs從莖細胞向成體細胞分化的過程中，細胞中p-RKAA2 Thr172和p-ULK1
Ser555水平穩定升高，而且AMPK抑制劑有效抑制HsCG誘導LC3B-II增加，并減少PRKAA2 Thr172和ULK1
Ser555的磷酸化，這些結果證實了LCs自噬誘導依賴于AMPK信號通路。
圖2. LCs的自噬依賴于AMPK信號通路
3.CAMKK2/PPM1A參與PRKAA2 Thr172磷酸化過程
為了探究在LCs中HsCG誘導p-PRKAA2 Thr172
增強表達的機制，作者檢測了兩種經典的磷酸化激酶CAMKK2和STK11/LKB1以及去磷酸化酶PPM1A，數據顯示HsCG可以誘導的CAMKK2表達增加和PPM1A的表達減少，此外，TM3細胞和初級LCs在CAMKK2敲低或者過表達PPM1A后，明顯抑制了HsCG誘導增加LC3B-II的表達、AMPK活化和降低SQSTM1的表達。
圖3. CAMKK2/PPM1A參與PRKAA2 Thr172磷酸化過程