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  • 發布時間:2022-11-10 12:32 原文鏈接: 盒式誘變的簡介

      盒式誘變(cassette mutagenesis)是一種定點誘變技術,其方法是利用一段人工合成的具有突變序列的雙鏈寡核苷酸片段,取代野生型基因中相應序列。這種誘變的雙鏈寡核苷酸片段是由兩條人工合成的寡核苷酸鏈組成的,當它們退火時,會按照設計要求產生出克隆需要的粘性末端。這些合成的寡核苷酸片段就好像不同的盒式錄音磁帶,可隨時插入到已制備好的載體分子(“錄音機”)上,便可以獲得數量眾多的突變體,故稱為盒式誘變。該方法的優點是簡單易行,突變效率高。

      盒式誘變包括簡單的盒式取代誘變和混合寡核苷酸誘變兩種方式。簡單的盒式取代誘變是通過限制性內切酶切除特定的雙鏈DNA片段,再與含有突變的單一序列雙鏈寡核苷酸連接,得到取代突變,是一種定點誘變。若用于取代的是含有隨機突變的混合雙鏈寡核苷酸,則可在限定區域內引入大量的隨機突變 [1] 。

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