本病需在臨診癥狀和病理剖檢的基礎上，結合微生物學和免疫學診斷才能確診。
1．微生物學診斷 病畜死前可采集血液、尿液。死后檢查要在1h內進行，最遲不得超過3h，否則組織中的菌體大部分會發生溶解。可以采集病死豬的肝、。腎、脾和腦等組織，病料應立即處理，在暗視野顯微鏡下直接進行鏡檢或用免疫熒光抗體法檢查。病理組織中的菌體可用姬姆薩氏染色或鍍銀染色后檢查。病料可用作病原體的分離培養。
2．血清學診斷 主要有凝集溶解試驗、微量補體結合試驗、酶聯免疫吸附試驗(ELISA)、炭凝集試驗、間接血凝試驗、間接熒光抗體法以及乳膠凝集試驗。
3．動物試驗 可將病料(血液、尿液、組織懸液)經腹腔或皮下接種幼齡豚鼠，如果鉤端螺旋體毒力強，接種后動物于3～5天可出現發熱、黃疸、不吃、消瘦等典型癥狀，最后發生死亡。可在體溫升高時取心血作培養檢測病原體。
4．分子生物學診斷技術 可用DNA探針技術、PCR技術檢測病料中的病原體。
5．鑒別診斷 豬的鉤端螺旋體病應與豬附紅細胞體病、新生仔豬溶血性貧血等相區別。