1. 將濾膜培養皿放入培養板或培養皿中。
2. 加入培養液,將培養皿傾斜,使培養液充滿濾膜下方的空間,盡量置換出空氣。加培養液至濾膜水平(6 孔板每孔 2.5 ml;24 孔板每孔 1.0 ml )。
3. 將培養板水平放置,在直徑為 25 mm 的濾膜上加入 2 ml 含有 2x106 個細胞的培養液,在直徑為 6.5 mm 的濾膜上加入 200 ul含有 5x105 個細胞的培養液,小心不要穿破濾膜。
4. 將培養板放在保護盒中,然后置于濕潤的 CO2 培養箱中培養。關鍵是避免震蕩保護盒,而且培養物不應在培養箱中移動,以免溢出和引起污染。
5. 在 3~5 d 內可形成單層,組織型分化(如極性轉運)可能需要 5~10 d 或更長時建立。
6. 可無限制地維持培養,每 3~5 d 更換培養液或將嵌套轉移到新的培養孔或培養皿。 展開 |