眾所周知，在實時熒光定量PCR（Quantitative Real-time PCR）中模板的濃度對數值與結果Ct值呈線性關系，Ct值越小，濃度越高。根據所選取定量數學模型的差別，主要有外標定量法（外標法）和內標定量法（內標法）兩種定量方法。這些數學模型就像特殊標記的尺子，把得到的Ct值測量為濃度值。
外標法：即絕對定量，是使用一系列稀釋的已知濃度標準品與臨床標本同時進行測定，求出標準品的Ct值與起始模板濃度之間的線性比例關系。通過待測標本的Ct值就可以在線性關系中求出其原始的模板濃度。 內標法：是指將標準內標與待測樣本在同一管內擴增，然后通過內標的量來推導待測模板的量，是一種相對定量的數學模型。該模型是假定了臨床樣本和內標有一致的擴增效率。[1] 內標法需要檢測標準品嗎？ 需要。要實現對樣本的定量檢測，必然需要使用到已知濃度的標準品，就像天平稱量離不開砝碼一樣。內標法就像是用了一個蘋果充當砝碼，但這個蘋果最初肯定得使用砝碼稱量一遍。 與外標法直接比較待測樣本和標準品不一樣，內標法使用靶基因Ct值和內標Ct值的差值進行運算。多一個維度的參數，使得該方法更為準確，但也使得運算更為復雜。該差值與靶基因起始模板量之間呈二次函數關系，所以需要測定更多的標準品（6個以上）才能保證這個二次函數的準確性。 因此，內標法不但需要檢測標準品，而且還需要檢測更多的標準品。 如何不帶標準品使用內標法？ 不帶標準品的內標法=調用標準曲線的外標法；由于成本的考慮，使用內標法的廠家大都未使用標準品。所以在檢測過程中，這些廠家便采用調取出廠標準曲線函數的方式。部分實驗室在使用外標法時也會用到這個方法，但這種方式往往是極不被推薦的。因為如果不能排除不同儀器、不同批試劑、不同實驗環境（溫度濕度）、不同實驗操作等因素造成的影響，那么結果的準確性就很難得到保證。 因而，無論是內標法還是外標法，如希望不帶標準品進行檢測，應盡量避免上述風險，所以只能選擇全封閉系統，并對使用環境做較為嚴苛的要求。 內標法可以徹底解決樣本間差異對定量結果的影響么？ 不能。不同的標本存在個體化差異，除靶序列的變異外，對PCR定量結果存在影響的還有多種因素。面對不同的干擾因素，兩種方法各有優劣。 注：“-”沒有影響；“+”有一定影響；“++”有較大影響； 小結 內標法和外標法作為兩種不同的PCR定量方法模型，有各自的特點，并無本質的優劣勢之分。作為一項檢測技術，以提供科學、客觀、準確的檢測結果為目的，為臨床醫生診斷和治療提供參考價值，充分體現檢測的臨床意義才是最重要的。
