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  • 發布時間:2020-09-01 11:35 原文鏈接: 放射免疫標記技術

    一、放射免疫標記技術

    放射免疫標記技術是將同位素分析的高靈敏度與抗原抗體反應的特異性相結合,以放射性同位素作為示蹤物的標記免疫測定方法,由于此項技術具有靈敏度高 (可檢測出毫微克(ng)至微微克(pg),甚至毫微微克(fg)的超微量物質,特異性強(可分辨結構類似的抗原)、重復性強、樣品及試劑用量少、測定方法易規范化和自動化等多個優點。因此、在醫學及其他生物學科的研究領域和臨床實驗診斷中廣泛應用于各種微量蛋白質、激素、小分子藥物及腫瘤標志物等的分析與定量測定。

    二、放射免疫測定(RIA)

    放射免疫測定(Radio immunoassay,RIA)是1959年Yalow和Berson首先創建的經典放射免疫分析技術,用于血清中胰島素含量的測定。30多年來,由于此項技術靈敏、特異、并已制成多種標準試劑盒,使用方便,應用范圍十分廣泛。目前國外已成功地應用RIA檢測的物質多達300余種,國內研究的被測物質也達百余種,試制的RIA試劑盒已有60余種,是測定各種微量物質不可缺少的手段。基本原理:RIA是標記抗原和未標記抗原對有限量抗體的競爭性結合或競爭性抑制反應。在RIA反應系統中,標記抗原(Ag*)、末標記抗原(Ag)和特異性抗體(Ab)三者同時存在時,由于兩種抗原具有相同的決定簇,互相競爭結合抗體的能力相同,結果形成Ag*-Ab和Ag-Ab復合物。

    當Ag*和Ab的量固定時,二者結合形成免疫復合物就受到Ag含量的制約。如反應系統中Ag含量高時,對Ab的競爭結合能力就強,Ag-Ab復合物的形成量就增加,Ag*-Ab復合物則相對減少;反之,當Ag含量低時,對Ab的競爭結合能力弱,Ag*-Ab復合物的形成量即增多。因此,Ag*-Ab 復合物的形成量與Ag含量之間呈一定的負相關函數共系。

    三、免疫放射測定(IRMA)

    1968年Miles和Hales應用同位素標記的抗胰島素抗體檢測牛血清中胰島素獲得成功,為了區別于經典的放射免疫測定(RIA),他們將其稱為免疫放射測定或免疫放射度量分析(IRMA)。由于在反應系統中使用過量的標記抗體,且無競爭性抑制反應,因此抗體與待測抗原達到結合狀態的化學平衡,在 2-3h即可完成,較少受到抗體親和常數的限制,即使單克隆抗體的親和力較低,也能滿足試驗要求。同時一個抗原分子可以結合多個標記抗體分子,使IRMA 的靈敏度明顯高于RIA。

    基本原理:IRMA是待測抗原與過量標記抗體的非競爭綜合反應,然后加入固相的抗原免疫吸附劑以結合游離的標記抗體,離心除去沉淀,測定上清液中放射性強度.從而推算出檢品中抗原含量。

    四、放射受體分析(RRA)

    受體是存在于細胞膜表面、細胞漿或細胞核內的生物活性物質,其功能是和細胞外的信息分子配體特異性結合,然后將信息轉變為生物效應。受體現已可從細胞或組織中分離、提取,進行定量和定位分析。放射受體分析或受體的放射配體結合分析,是建立在放射性標記配體與受體之間的結合反應,它是目前對受體分子進行定量和定位分析研究的靈敏、可靠的一項技術。在藥物設計、作用機理、生物效應及疾病的病因探討,診斷和治療等方面的應用已有較大進展。

    基本原理:放射受體分析的原理與免疫放射測定相似。應用放射性同位素標記配體,在-定條件下與相應受體結合成配體-受體復合物。由于二者的結合是表達配體與受體間的生物活性而非免疫活性,因此具有更高的特異性。放射受體分析可用于測定受體的親和常數、解離常數、受體結合數以及定位分析等。

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