推進BRAF基因突變檢測提高臨床腫瘤診療水平

　　日前，在“中華醫學會病理學分會第二十一次學術會議暨第五屆中國病理年會”期間，中國醫學科學院腫瘤醫院病理科教授應建明分享了BRAF基因突變檢測在甲狀腺癌、結直腸癌等實體瘤鑒別診斷、治療指導及預后管理方面的重要意義以及免疫組化BRAF V600E抗體檢測方法的臨床應用。

　　應建明表示：“在病理診斷中，BRAF V600E在多種腫瘤中均有表達，我們的研究及相關文獻均表明，其對于多種腫瘤的預后管理、鑒別診斷及治療等都有很好的臨床價值，BRAF突變檢測對腫瘤預后評估、靶向治療等均意義重大。”

　　BRAF V600E突變檢測助力結直腸癌的鑒別診斷、治療指導和預后管理

　　根據世界衛生組織（WHO）數據，結直腸癌（CRC）位列男性常見惡性腫瘤第三位和女性常見惡性腫瘤第二位，約5%~15%結直腸癌會發生BRAF位點特異性突變，其中超過90%為BRAF V600E突變。

　　BRAF V600E可用于結直腸癌鑒別診斷。BRAF V600E突變可排除林奇綜合征（LS），指示為散發型結直腸癌（SCRC）。BRAF V600E檢測有效簡化了LS診斷流程，采用錯配修復基因（MMR）蛋白免疫組化染色法對疑似患者進行篩查。若MMR蛋白表達正常，可排除LS；而MMR蛋白表達缺失的時，須具體分析MLH1、MSH2、MSH6及PMS2四種蛋白具體表達情況。如MLH1缺失，則進行BRAF突變分析，若為V600E陽性預示很可能患有SCRC。歐洲臨床腫瘤協會（ESMO）和美國國立綜合癌癥網絡（NCCN）指南建議，當MLH1基因缺失時，應檢測BRAF V600E以排除SCRC。

　　BRAFV600E還可幫助臨床醫生進行CRC預后管理和指導治療。BRAF V600E突變導致CRC患者預后不良概率提升，預示著更低的總生存期，尤其對于晚期患者，V600E突變陽性預示預后非常差。盡管尚存在爭議，目前有限資料提示，V600E突變患者抗EGFR單抗治療應答率明顯低于BRAF野生型患者。

　　BRAF V600E檢測有效輔助甲狀腺癌診療及預后

　　作為最常見的內分泌惡性腫瘤，依據病理分型，甲狀腺癌包括甲狀腺乳頭狀癌（PTC）、甲狀腺濾泡狀腺癌（FTC）、甲狀腺未分化癌（ATC）及甲狀腺髓樣癌（MTC），其中PTC占80%~90%，主要包括經典型、濾泡型和高細胞型等亞型。

　　BRAF V600E突變發生在40%~70%PTC中，而在FTC、MTC、嗜酸性細胞腺癌、腺瘤和良性甲狀腺增生中極少發現，因此BRAF V600E可作為PTC臨床鑒別診斷指標。因BRAF V600E與PTC惡性特征具有相關性，與腫瘤大小等高風險特征呈正相關，可輔助PTC診斷。在PTC診斷中，甲狀腺細針穿刺活檢（FNAB）單獨診斷其敏感性僅為63.3%，而采用FNAB與BRAF V600E聯合檢測，敏感性可提升至80%。美國甲狀腺協會（ATA）管理指南建議，有甲狀腺結節的患者在細胞學活檢不確定時，建議使用分子標志物（如BRAF、RAS、RET/PTC等）進行輔助診斷。

　　BRAF V600E突變與PTC侵襲性及不良預后有關，可為PTC治療提供參考。術前檢查PTC的BRAF V600E基因突變可輔助預測術后復發風險、指導手術切除范圍及術后后繼治療。在PTC預后方面，BRAF V600E突變長期預后差，預示著更差的碘攝入及更高的復發概率和病死率。NCCN2014年第2版甲狀腺癌指南指出，腫瘤的組織學類型、腫瘤大小、局部浸潤及壞死、血管浸潤以及BRAF基因突變狀態和轉移是影響預后的重要變量。

　　免疫組化BRAF V600E（VE1）抗體檢測優化多項腫瘤診斷

　　近幾年來，免疫組化技術（IHC）用特異性抗體VE1識別V600E突變蛋白來檢測BRAF突變，與分子生物學檢測Sanger測序法一致性達95%以上，兼具低成本和高效的優勢，更適合作為初篩手段，正逐漸成為當前BRAF基因突變常用檢測方法。

　　2015年10月第一屆中美腫瘤診斷病理高峰論壇期間，美國蓋辛格健康系統機構（Geisinger Health System）免疫組化實驗室主任陳宗明分享了一項對比IHC染色與分子生物學檢測方法研究，結果顯示，2085例CRC患者中24% BRAF V600E突變為陽性，兩種檢測方法一致性高達95%~99%，且在驗證研究中得到證實。在結果報告方面，如染色確認陽性，無須跟進檢測，如染色可疑或為陰性，須進行分子生物學檢測。

　　陳宗明表示：“進行BRAF V600E IHC檢測的關鍵在于確保檢測質量。以CRC診斷為例，BRAF特異性突變IHC檢測能夠通過IHC結果指導測序，一定程度上簡化流程，具有更優的成本效益比。建議將BRAF V600E IHC檢測應用于LS、PTC等疾病篩查中，并定期評估其與分子生物學檢測間的一致性，做好質評與質控。”

　　2015年3月，Nature雜志Scientific Reports子刊發表了一篇來自于中國醫學科學院腫瘤醫院應建明團隊的研究，文章深入研究了Sanger測序、RT-PCR及IHC三種方法學在檢測實體瘤BRAF V600E突變中的一致性。該研究選取779名患者，覆蓋611例結直腸癌、127例甲狀腺癌及41例惡性黑色素瘤病例，使用羅氏診斷BRAF V600E（VE1）抗體，在Ventana BenchMark全自動染色平臺進行IHC檢測。779例患者中，150例VE1染色陽性。對349例患者又進行Sanger測序及RT-PCR（cobas 4800）檢測（包括150例VE1陽性病例）。統計結果顯示，IHC方法學靈敏度和特異性分別為100%和99%，可作為BRAF突變檢測很好的初篩工具，并對預后和治療方案提出指導。

　　作為率先用于體外診斷BRAF突變的即用型抗體，羅氏診斷BRAF V600E（VE1）抗體可聯合OptiView DAB IHC檢測試劑盒提供具有臨床意義的突變檢測，對檢測多種腫瘤中單細胞水平BRAF V600E突變具有良好的敏感度和特異性。與現有分子檢測方法相比，BRAF V600E（VE1）抗體檢測可縮短周轉時間，一種檢測即可適用于結直腸癌、甲狀腺癌、毛細胞白血病與其他多種癌癥中的BRAF V600E突變蛋白診斷，為解剖病理實驗室提供快速準確的檢測結果。