愈傷組織和試管苗的培養

一、愈傷組織的培養 一般來說，從接種外植體到出現愈傷組織，需要經過2周時間。2周之內就可以看到外植體上逐漸長出乳白色或黃白色的瘤狀愈傷組織。首次培養愈傷組織時，恒溫箱的門應該關閉，不必見光，因為在無光條件下愈傷組織長得更快。2周以后，由于培養基中的營養成分已接近耗盡，必須更換培養基，進行繼代培養。

二、愈傷組織的繼代培養 進行繼代培養所用的培養基，和培養愈傷組織所用的培養基相同。在嚴格的無菌條件下(接種箱內)將愈傷組織連同原來的外植體，一起移到新的培養基上。愈傷組織的繼代培養，一代為20 d。如果延長培養時間，培養基中的營養物質會減少，外植體也會分泌一些有毒物質，造成自身中毒。20 d以后，可以根據愈傷組織的大小，決定是繼續進行繼代培養，還是進行試管苗培養。如果愈傷組織長到直徑為1～15 cm時，就可以進行試管苗培養，否則還需要進行第二次繼代培養。

在愈傷組織進行繼代培養期間，可以將恒溫箱的門打開，讓愈傷組織見光。愈傷組織見光后，顏色可以轉為綠色。

三、試管苗的培養 當愈傷組織長到一定大小后，可以更換培養基，進行試管苗的培養。試管苗的培養分為生芽培養和生根培養。要想培育出一株完整的試管幼苗，必須先進行生芽培養，然后進行生根培養。如果順序顛倒，先誘導生根，就不好誘導生芽了。生芽大約需要4～6周的時間，而生根培養時，1周以后就可以見到幼根了。

注意，試管苗應該進行見光培養。

下面列出繼代培養和試管苗培養的培養基配方。

1、繼代培養和生芽培養的培養基配方是：MS培養基 6BA(質量濃度為0.5～1.0 mg/L) NAA(質量濃度為0.1～0.15 mg/L)。即在1 L MS培養基中加入5～10 mL6BA和1～1.5 mL的NAA母液。NAA配合6BA，可以促進不定芽的生長。

2、生根培養的培養基配方是：MS培養基 NAA(質量濃度為0.1～0.5 mg/L)。即在1 L MS培養基中加入1～5 mL的NAA母液。NAA起促進生根的作用。