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  • 發布時間:2020-08-17 12:07 原文鏈接: 微量制備毛細管電泳實驗

    實驗方法原理

    實驗材料 多肽:ACTH 4-10

    試劑、試劑盒 血管緊縮素I和血管緊縮素II 0.05 mmol/L 和 0.25 mmol/L 磷酸鈉緩沖液(pH 2.30 存儲于 4℃)0.1 mol/L 氫氧化鈉

    儀器、耗材 75 μm 內徑的融合硅毛細管柱CE 儀器錐形微量瓶

    實驗步驟

    1. 低壓下(0.5 lb/in2)用以下溶液沖洗預處理毛細管:

    10 倍柱體積的 0.1 mol/L NaOH

    10 倍柱體積的水

    4 倍柱體積的 0.25 mol/L 磷酸鈉緩沖液,pH 2.30。

    柱存儲于 0.25 mol/L 磷酸鈉緩沖液,pH 2.30。


    2. 將各 0.2 mg 的 ACTH4-10、血管緊縮素 I 和血管緊縮素 II 溶于 1 ml 0.05 mol/L 磷酸鈉緩沖液,pH 2.30(終濃度 = 0.6 mg 多肽/ml)制備多肽混合物。凍存 100 μl 每管混合物于 -20℃。


    3. 在 0.5 lb/in2,10 s 內用低壓注射上樣 10~20 nl 多肽混合物。


    4. 使用以下條件分離多肽混合物:

    電解質:0.05 mol/L 磷酸鈉緩沖液,pH 2.30

    探測波長:200 nm

    溫度:25℃

    電壓:25 kV

    分部大小:每收集管 3 min


    5. 用一系列的含 10 μl 0.05 mol/L 磷酸鈉緩沖液,pH 2.30 的微量錐形瓶替換標準的出口池(正極)。收集 3 min 的組分于每一個瓶子以利于了解分離的長度。


    6. 重復注射和分離(步驟 3~5)4 次,合并來自相應的組分號碼的內容物。


    7. 用以前闡述的分析分離法監視多肽內容的組分(見解析多肽分離實驗)。


    注意事項

    其他

    多次收集方法要有效,多肽的洗脫時間必須具有重復性。以下的方法使用P/ACE5000毛細管電泳儀器進行多肽混合物的分離。


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