實驗方法原理
實驗材料 多肽:ACTH 4-10
試劑、試劑盒 血管緊縮素I和血管緊縮素II 0.05 mmol/L 和 0.25 mmol/L 磷酸鈉緩沖液(pH 2.30 存儲于 4℃)0.1 mol/L 氫氧化鈉
儀器、耗材 75 μm 內徑的融合硅毛細管柱CE 儀器錐形微量瓶
實驗步驟
1. 低壓下(0.5 lb/in2)用以下溶液沖洗預處理毛細管:
10 倍柱體積的 0.1 mol/L NaOH
10 倍柱體積的水
4 倍柱體積的 0.25 mol/L 磷酸鈉緩沖液,pH 2.30。
柱存儲于 0.25 mol/L 磷酸鈉緩沖液,pH 2.30。
2. 將各 0.2 mg 的 ACTH4-10、血管緊縮素 I 和血管緊縮素 II 溶于 1 ml 0.05 mol/L 磷酸鈉緩沖液,pH 2.30(終濃度 = 0.6 mg 多肽/ml)制備多肽混合物。凍存 100 μl 每管混合物于 -20℃。
3. 在 0.5 lb/in2,10 s 內用低壓注射上樣 10~20 nl 多肽混合物。
4. 使用以下條件分離多肽混合物:
電解質:0.05 mol/L 磷酸鈉緩沖液,pH 2.30
探測波長:200 nm
溫度:25℃
電壓:25 kV
分部大小:每收集管 3 min
5. 用一系列的含 10 μl 0.05 mol/L 磷酸鈉緩沖液,pH 2.30 的微量錐形瓶替換標準的出口池(正極)。收集 3 min 的組分于每一個瓶子以利于了解分離的長度。
6. 重復注射和分離(步驟 3~5)4 次,合并來自相應的組分號碼的內容物。
7. 用以前闡述的分析分離法監視多肽內容的組分(見解析多肽分離實驗)。
注意事項
其他
多次收集方法要有效,多肽的洗脫時間必須具有重復性。以下的方法使用P/ACE5000毛細管電泳儀器進行多肽混合物的分離。