幽門螺桿菌檢測方法標準化的建議

【據《中華微生物學和免疫學雜志》2015年6月報道】題：2009-2014年浙江省蒼南縣就醫患者幽門螺桿菌耐藥性分析（作者陳秋玲等）

根據文中內容，提出以下問題進行商榷。

1. 該文作者判定H. pylori菌落為透明，不同于權威手冊關于H. pylori菌落形態的描述。根據文獻^［1］判定菌落的稠密性（density），分為不透明（opaque）、半透明（translucent）和透明（transparent），幽門螺桿菌（H. pylori）菌落在含血瓊脂培養基上呈現半透明^［2］。該文作者應該指明所使用的培養基，并且描述H. pylori模式菌株ATCC43504菌落在該培養基上的形態特征。

2. 該文作者認為H. pylori革蘭染色陰性，形態為弧形、S、V、或W形，結合氧化酶、觸酶、脲酶陽性試驗，判定為H. pylori。這種操作容易產生假陽性和假陰性錯誤的結果。

（1）假陽性：除了H. pylori以外，還有5個種也可以引起人類胃炎和潰瘍^［3,4,5］，分別是Helicobacterbizzozeronii，Helicobacterfelis，Helicobacterheilmannii，Helicobactersalomonis和Helicobactersuis。這6個種的氧化酶、觸酶、脲酶都為陽性，具體鑒別見表1^［4,5］。為了區別這6個種，建議增加硝酸鹽還原試驗、Indoxylacetate水解、42℃生長試驗和鞭毛染色進行鑒別。如果結合形態把氧化酶、觸酶、脲酶3個試驗均為陽性的菌株判定為H.pylori，那么會存在其他5個種被鑒定為H. pylori的可能，這樣易出現假陽性錯誤。

（2）假陰性：該文作者只鑒定典型形態的H. pylori，就會漏檢非典型形態的H. pylori，從而發生假陰性錯誤。因為H.pylori除了典型形態外，在培養條件或者抗生素影響下還可以形成球狀非典型形態^［1］。

以上兩種情況盡管少見，但不能忽視其存在。

3. 該文作者用3天時間分離培養H. pylori，沒有說明原因，且這樣做可能會發生漏檢。因為幾乎所有的文獻也包括最新版的Manualof Clinical Microbiology (11th edition)^［5］報告分離培養H. pylori需要72h以上，最好的方法是使用哥倫比亞瓊脂培養基+馬血分離培養2-10天，培養10天才能報告陰性結果^［5］，使用馬血可能好于綿羊血。

4. 藥敏試驗標準化問題

該文作者報告使用5%新鮮脫纖維綿羊血+哥倫比亞瓊脂培養基，應用瓊脂稀釋法進行藥敏試驗，結果判定依據CLSI藥敏折點。但CLSI應用的是MH瓊脂+5%陳舊綿羊血^［4,5］。應用不同的培養基可能會使藥敏結出現偏差，該文沒有報告比較兩種培養基藥敏結果數據，所以不能依據CLSI藥敏折點判讀藥敏結果。并且該文作者接種2μl菌液，沒有指明菌液濃度；如果菌液濃度不同，就可能不會有確定的MIC藥敏結果。

5.該文作者沒有進行質量控制試驗，這樣很難保證在5年內有很好的可比性試驗結果。不論是H. pylori鑒定還是進行藥敏試驗，都應該選用ATCC菌株進行質控。如果不進行質控，實驗結果會發生錯誤，試驗結果不能報告臨床，醫生也不能依據實驗結果進行治療。

H. pylori是世界上引起各種胃炎、十二指腸球炎和消化性潰瘍最常見的致病菌，也和胃癌、胃MALT淋巴瘤密切相關，H. pylori感染率可達50%以上，因此根除治療H. pylori感染很有必要。為了預防和治療H. pylori感染引起的疾病，進行H. pylori培養、藥敏試驗技術及耐藥性監測研究有十分重要的意義。但要保證檢測方法的標準化，才能更好地根除幽門螺桿菌感染。