| 實驗步驟 |
1.戴上帆布手套,以脫頸椎法處死小鼠,立即用剪刀剪去大腿處的皮膚和肌肉,連同關節頭一起取下兩側股骨和脛骨,剔凈其上肌肉,用2%檸檬酸鈉溶液洗凈。剪去關節頭,使其露出骨髓腔,用吸有適量2%檸檬酸鈉溶液的注射器,將針頭插入骨髓腔,將骨髓用檸檬酸鈉溶液吹洗入刻度離心管,反復洗直至骨腔變白。
2.將所得的骨髓細胞懸浮液1000r/min離心10min,吸去上清液,加0.075mol/L KCl 5～8ml,立即用吸管吹打均勻,室溫下靜置低滲25min。
3.1000r/min離心10min,去上清液,沿管壁加5～8ml甲醇-冰醋酸(3∶1)固定液,立即吹散打勻,靜置30min。
4.離心去上清液,留約0.1～0.2ml的沉淀細胞和上清液,用吸管反復輕吸混勻,制成細胞懸浮液。
5.取潔凈冰水中預冷的載玻片,稍作傾斜,用吸管吸取一滴上述細胞懸浮液,于載玻片上方適當高度滴在載玻片上,立即吹散吹勻載玻片上細胞,空氣干燥。
6.載玻片充分干燥后,用pH6.8的磷酸緩沖液按1份Giemsa原液、9份磷酸緩沖液混勻后染色。材料面向上,用染液覆蓋載玻片,染色10～15min,用流水洗去多余染液,再用吸水紙吸干多余水分,干燥后即可鏡檢。在載玻片上用石炭酸品紅染色10min左右也可。
7.在低倍及中倍鏡下觀察Giemsa染色之后的染色體制片,找出分散適度的中期染色體圖像,并在油鏡頭下仔細觀察,熟悉小鼠染色體的形態,統計骨髓細胞染色體數目
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