前言
目前，在對包括癌癥在內的各種疾病的診斷和治療中，單克隆抗體（mAbs）起到了越來越重要的作用，其相關研究發展也十分迅速。不同于傳統的小分子藥物，單克隆抗體的結構十分復雜，存在多種異構現象，故單克隆抗體結構表征就顯得尤為重要。由于生物質譜所具有的“軟電離”模式和高靈敏度、高質量精度和寬動態范圍等優點，在單克隆抗體分子量測定、蛋白序列測定、翻譯后修飾分析及雜質分析等方面，質譜正在起到越來越重要的作用。
離子阱質譜經常被用于未知物的結構解析，以及常規的蛋白序列測定、翻譯后修飾和糖鏈結構解析等。已有實驗結果表明，使用LTQ Velos 離子阱質譜可以對小的完整蛋白（16kDa）進行top down 解析[1]；然而，使用離子阱質譜對150kDa 的完整單克隆抗體進行完整分子量測定尚未見報道。
在本文的研究中我們使用Velos Pro 雙壓線性離子阱質譜，對完整單克隆抗體及其輕重鏈分別進行了分子量測定。實驗結果表明，離子阱質譜也能對150kDa 的完整單克隆抗體進行分子量測定，且不同糖型可得到分辨。
實驗部分
樣品信息
本次實驗使用完整單克隆抗體樣品，樣品濃度2μg/μL；取部分樣品上樣至常規液相色譜，經在線脫鹽后質譜測定其分子量；另取部分完整單克隆抗體樣品經二硫蘇糖醇（DTT）對二硫鍵還原烷基化后上樣至LC-MS 系統，分別測定輕、重鏈分子量。
常規液相色譜方法
色譜儀：Thermo Scientific Accela 600
色譜柱：Thermo BioBasic 8 HPLC（5μm, 2.1mm, 100mm）
上樣量：4μL（8μg）
流動相：A: 0.1% 甲酸水溶液，B: 0.1% 甲酸乙腈溶液梯度如下，其中前四分鐘為在線除鹽過程：
質譜方法
質譜儀：Velos Pro 線性離子阱質譜儀
噴霧電壓：3.8 kV
毛細管溫度：275 ℃
S-lens：66.8%
Scan Rate：Normal
m/z range：800-3500
In source CID：75eV
AGC target：3e5
數據分析
數據使用ProMass 軟件進行去卷積分析。
結果與討論
Velos Pro 線性離子阱質譜用于完整單克隆抗體分子量測定
圖1. LTQ Velos Pro 測定完整單克隆抗體分子量原始譜圖