初代細胞培養實驗——組織塊培養法

組織

Hanks培養液胰蛋白酶NaHCO3

吸管培養瓶燒杯眼科剪眼科鑷

1.  剪切

把組織小塊（1cm³）置入小燒杯或青霉素小瓶中，用Hanks液漂液二三次以去掉表面血污，吸凈Hanks液，用眼科剪反復剪切成1mm³塊為止；

2.  擺布

用彎頭吸管吸取若干小塊，置入培養瓶中；用吸管彎頭把組織小塊擺布在培養瓶底上，小塊相互距離以0.5 cm 為宜，每一25 ml培養瓶底可擺布20~30 塊；

3.  輕輕翻轉培養瓶，令瓶底向上；注意翻瓶時勿令組織小塊流動，塞好瓶塞，置36.5 ℃溫箱2 小時左右（勿超過4 小時），使小塊微干涸；

4.  培養

從溫臬中取出培養瓶，開塞，46 度斜持培養瓶（瓶底仍向上），向瓶底角部輕輕注入培養液小許，然后緩緩再把培養瓶翻轉過來，讓培養液慢慢覆蓋附于瓶底上的組織小塊（組織小塊附著尚不牢，注意不要把組織塊沖走）；置溫箱中靜止培養。待細胞從組織塊游出數量增多后，再補加培養液。

一、評價

翻轉培養瓶的目的是為使組織塊微干涸，以利附和免從瓶壁流失，但時間不宜過長，超過三四小時以上可能對組織有不利影響。

組織塊培養法操作簡便，順利情況下，組織小塊貼壁培養后24 小時，細胞即可從小塊邊緣向四周游出，通過生長增殖，最終亦可連接成片；原組織小塊可完全散成細胞而消失。如組織塊過大，殘留小塊換液時棄掉或再置另瓶中繼續培養。

組織塊通過反復剪切可能受一定損傷，并非每塊組織都有生長能力，但只要有一部分能生長往往即可形成單層。