關于免疫熒光技術—熒光免疫測定的基本介紹

　　熒光免疫測定與酶免疫測定一樣，可分均相和非均相法。均相法常利用熒光的某些特性，如熒光的激發、吸收、猝滅等設計試驗，無需作結合的與游離的標記物分離。雙標記法即為均相熒光免疫測定的一種類型，檢測試劑為FITC標記的抗原和羅丹明標記的抗體，當兩種標記物標記的抗原和抗體特異性結合后使兩種熒光素靠近，由于FITC的發射光譜能被羅丹明吸收，從而使FITC的熒光明顯減弱。試驗時將可能含有抗原的標本與兩種標記物一起反應，則能與FITC標記的抗原競爭結合羅丹明標記的抗體，從而減少羅丹明對FITC發射光譜的吸收。通過FITC熒光測定可推算出標本中抗原的量，其與熒光強度成正比。非均相法限于實驗室條件、試劑和容器或載體的非特異性熒光干擾等，應用不及ELISA廣泛。近年建立的時間分辨熒光免疫測定(time resoloved fluorescence immunoassay，TR-FIA)有很大改進，該法利用稀土金屬(銪、鋱等)的螯合物具有特長的熒光壽命，將其標記抗體并延長測定時間，以使短命的非特異性熒光衰退，從而測得均一的長壽命稀土螯合物熒光。此外稀土螯合物的激發光吸收峰(340nm)與熒光發射峰(613nm)之間的差別顯著，也利于排除非特異熒光的干擾。目前已用于IgE等微量血清成分及激素和某些藥物水平的測定。