全血直接PCR試劑盒BloodDirectPCRKit

全血直接PCR試劑盒Blood Direct PCR Kit全血擴增引物設計注意事項

1）引物3’端zui后一個堿基選擇C或G；

2）引物3’端zui后8個堿基應避免出現連續錯配；

3）引物3’端盡量避免出現發夾結構；

4）引物Tm值控制在60℃-72℃之間 (推薦使用軟件Primer Premier 5進行計算)；

5）引物額外附加序列，即與模板非配對序列，不應參與引物Tm值計算；

6）引物GC含量控制在40%-60%之間；

7）正向引物和反向引物Tm值以及GC含量盡可能一致。

全血直接PCR試劑盒（Blood direct PCR Kit）可以直接對全血樣本進行PCR，無需進行DNA純化或樣品預處理，大大降低了污染風險，縮短時間和節約支出。

試劑盒中包含配方優化的2 × Blood Buffer，而血液DNA聚合酶專為全血DNA直接擴增而設計，對全血樣品中的PCR抑制劑具有超強的抵抗力，可擴增全血濃度高達40%。高度優化的反應體系使得Blood direct PCR Kit能夠從全血樣品中高效擴增長達10 kb的基因組片段。擴增產物為平端，適用于HieffCloneTM快速克隆試劑盒 (11001ES25/ 11002ES10)。另外，試劑盒中配有與哺乳動物和其他許多脊椎動物兼容的引物預混液Positive control primer mix，可用于進行陽性對照反應。

該試劑盒可用于直接擴增的血樣類型包括：新鮮血液、4℃貯存血液、冷凍血液以及儲存在Whatman 903?和FTA?商用卡上的干血，且兼容所有常規抗凝劑 (EDTA、檸檬酸鹽、肝素等)。Blood Direct PCR Kit已經在許多哺乳動物物種上進行了成功測試，并成功擴增了幾種禽類全血。