DNA解旋酶（DNA helicase）
通常為流體蛋白環，通過ATP水解產生的能量由解旋酶裝載器裝載到DNA單鏈上（單鏈穿過環中央），有3‘--5’或5‘--3’方向極性，該極性就是它結合的單鏈的極性。它像DNA聚合酶一樣具有延伸性。
與解旋酶裝載器結合，裝載到單鏈DNA上之前，DNA解旋酶是沒有活性的，只有解旋酶裝載器將它裝載到單鏈DNA上，解旋酶裝載器自動離開之后，DNA解旋酶的活性才被激活。直到雙鏈全部解開，運動到單鏈末端時，它才從單鏈上離開。
注意DNA解旋酶結合的是DNA單鏈而不是雙鏈，至于它結合的單鏈，是由起始子蛋白作用到被稱為復制器的DNA區段使該區段發生雙鏈解旋才產生的。
DNA解旋酶作用于DNA雙鏈的氫鍵上。