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化學發光(chemiIuminescence)是在化學反應過程中(主要為氧化還原反應)發出可見光的現象【4】。早在19世紀7O年代,Radzisewski(1877)等發現咯粉堿在堿性介質中與過氧化氫等進行氧化還原時,有光子產生(發綠光)。Albrecht(1928)證明了魯米諾在堿性介質中具有發光作用。Glue和Petsh(1 935)第一個報告了光澤精在堿性條件下與過氧化氫反應產生化學發光。
化學發光反應是由兩個關鍵步驟組成:激發和發射。許多化學反應進行時能釋放足夠的自由能而把參加反應的物質之一激發到能發射光的電子激發態,生成一種激發態產物(c ),在它回到基態時,剩余能量轉變成光子能量(h )產生發光現象,即A+B—c ,然后c 一C+h,其中 表示c處于單線激發態。化學發光的光譜與c的熒光相一致。
隨著化學發光物質合成技術的進步,化學發光在生物醫學及其它領域的應用越來越廣泛【5_ ,將化學發光與免疫反應結合起來建立的化學發光免疫測定法和化學發光標記是繼熒光標記,放射性核素標記,酶標記三大標記技術之后,發展起來的最新檢測技術。用化學發光法、化學發光免疫測定法可檢測多種物質,其檢測極限達到10—15mol。近2O年來在此領域發表有關論文達數千篇,我國在這方面的研究雖然起步較晚,但也取得了很大進步,例如用黃嘌呤氧化酶一魯米諾(xo—L)化學發光體系測定不同茶葉清除超氧陰離子的能力[8】,發現不同品種的茶葉的抗氧化活性存在一定的差異,一般情況下綠茶優于烏龍茶和紅茶,名茶優于普通茶,優級茶優于次級茶;利用該系統還討論了影響茶葉抗氧化能力的條件。利用化學發光研究血小板對多形核白細胞fPMN)化學發光的調控作用,發現腺苷酸對PMN化學發光的調控作用具有濃度依賴性,且呈雙相效應【9】等。這些工作促進了我國化學發光體系的研究。
化學發光的原理
化學發光是物質在進行化學反應過程中伴隨的一種光輻射現象,可以分為直接發光和間接發光。直接發光是最簡單的化學發光反應,有兩個關鍵步驟組成:即激發和輻射。如A、B兩種物質發生化學反應生成C物質,反應釋放的能量被C物質的分子吸收并躍遷至激發態C*,處于激發的C*在回到基態的過程中產生光輻射。這里C*是發光體,此過程中由于C直接參與反應,故稱直接化學發。
間接發光又稱能量轉移化學發光,它主要由三個步驟組成:首先反應物A和B反應生成激發態中間體C*(能量給予體);當C*分解時釋放出能量轉移給F(能量接受體),使F被激發而躍遷至激發態F*;最后,當F*躍遷回基態時,產生發光。
一個化學反應要產生化學發光現象, 必須滿足以下條件: 第一是該反應必須提供足夠的激發能, 并由某一步驟單獨提供, 因為前一步反應釋放的能量將因振動弛豫消失在溶液中而不能發光; 第二是要有有利的反應過程, 使化學反應的能量至少能被一種物質所接受并生成激發態; 第三是激發態分子必須具有一定的化學發光量子效率釋放出光子, 或者能夠轉移它的能量給另一個分子使之進入激發態并釋放出光子。
化學發光分析測定的物質可以分為三類:第一類物質是化學發光反應中的反應物;第二類物質是化學發光反應中的催化劑、增敏劑或抑制劑;第三類物質是偶合反應中的反應物、催化劑、增敏劑等。這三類物質還可以通過標記方式用來測定其他物質,進一步擴大化學發光分析的應用范圍。
化學發光反應的發光類型通常分為閃光型(flash type)和輝光型(glow type)兩種。閃光型發光時間很短,只有零點幾秒到幾秒。輝光型又稱持續型,發光時間從幾分鐘到幾十分鐘,或幾小時至更久。閃光型的樣品必須立即測量,必須配以全自動化的加樣及測量儀器。輝光型樣品的測量可以使用通用型儀器,也可以配有全自動化儀器。本產品針對輝光型化學發光反應進行檢測。
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