人抑胃肽(活性型)ELISA試劑盒使用說明（二）

3實驗步驟
使用前，將所有試劑應平衡至室溫，大約30min，充分混勻，確保試劑質量無改變，標準曲線和樣品檢測必須同時進行.
 

1）設試劑空白對照，并于相應的微孔中加入100ul EIA緩沖液
2）  確定好樣品空白對照孔，檢測樣品孔和標準品孔，分別將100ul樣品對照品(8號管)、檢測樣品和稀釋好的標準品(1-7號管)加入到相應的微孔中。
3）蓋板，37°C下溫育60min
4）用洗滌瓶或自動洗板機按以下說明洗板4次
    倒去孔內反應液,每孔加滿稀釋洗滌液洗板,再棄去廢液.重復洗板4次.在吸水紙上拍干,去除殘留液滴.
5）除試劑空白對照孔外,其余每孔各加100ul酶標抗體
6）蓋板，4°C下溫育60min
7）按照上述步驟4）洗板5次
8）  用一次性試管取所需量的顯色劑，各加100ul顯色劑于微孔中.為了避免污染，勿將剩余試劑在倒回試劑瓶中
9）室溫避光溫育30min，加入顯色劑后溶液顏色會變成藍色
10）每孔各加100ul終止液，溶液顏色會變成黃色
11）擦去微孔板底部的污跡或水滴，確保微孔內溶液無氣泡產生.加入終止液后30min內于酶標儀450nm處讀取結果
 
特別注意

1. 收集樣品后即盡快檢測. 如需保存, 凍存樣品,但要避免反復凍融.檢測前,將樣品解凍至室溫.

2. 如樣品需稀釋,用EIA緩沖液稀釋

3. 建議做雙份檢測

4. 保持樣品處于中性PH范圍.有機溶劑的污染會影響實驗結果

5. 只能用本試劑盒提供的洗滌液洗板.不充足的洗板會導致錯誤的結果

6. 在吸水紙上拍干去除殘留液滴時,切勿用吸水紙刮擦孔內壁

7. 顯示劑應避光保存并避免與金屬物質接觸

8. 加終止液后,30 min內就應讀取實驗結果

 
結果計算
所有實驗數據(包括標準品,檢測樣品的OD值),都應減去樣品空白對照的OD值.
在log-log坐標紙用,以較正的OD值為縱坐標,相對應的濃度為橫坐標,建立標準曲線. 樣品直接在標準曲線上獲取濃度值.
標準曲線示范

 
上圖所示典型標準曲線僅用于演示示范,不能用于試驗數據的獲取.每次實驗都應建立其標準曲線.
 
常規事項
1所有試劑置于2 - 8°C保存.實驗前將試劑平衡至室溫(約30分鐘)
2瓶裝標準品是凍干品,故小心打開瓶蓋
3終止液是強酸物質.使用時,避免其接觸皮膚和衣膚.
4棄置用過的物質前,用水沖洗
5 濃縮酶標抗體,EIA緩沖液和濃縮洗滌液可能會出現沉淀,但這并不會影響實驗
6使用試劑后應洗手
7切勿混用不同批號的試劑
8別使用過期的試劑
9試劑盒僅供研究用,不能用于臨床診斷.
 
 
存儲與有效期
存儲條件:2 - 8°C
有效期見試劑盒外包裝
 
本譯文僅供參考，詳情請以原文為準。