人五羥色胺ELISA檢測試劑盒使用說明

試驗原理：

5-HT試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗（ELISA）.已知5-HT濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將5-HT和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A、B，和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中5-HT的濃度呈比例關系。

自備材料

蒸餾水。

加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。

振蕩器及磁力攪拌器等。

安全性

避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。

實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

樣品收集、處理及保存方法

血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液

保存------如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

操作步驟

使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產生加樣上的誤差。

根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定，能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應孔內。

加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。

甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。

每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。

甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。

每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。

取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結果。

在450nm波長處測定各孔的OD值。

局限

6號標準品以上的結果為非線性的，根據此標準曲線無法得到的結果。

試劑盒性能

1. 靈敏度：最小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。

2. 特異性：不與其它細胞因子反應。

3. 重復性：板內、板間變異系數均小于10%。