交叉電泳實驗技術

（一）原理

    交叉免疫電泳是把瓊脂平板電泳和火箭電泳結合起來的一種方法。先將抗原樣品在瓊脂凝膠中進行電泳分離，然后使已分開的各抗原成分與原泳動方向呈90度角的方向泳向含抗體的瓊脂凝膠中，于是該抗原樣品中的各個抗原成分和它相對應的抗體依次形成若干錐形沉淀線，根據沉淀線的位置及面積（或高度）可確定該抗原的質和量。

     此試驗可以用來鑒定抗原，即與標準抗原抗體系統相比較，就可知待測樣品中抗原的質和量。此法也可以鑒定抗體，把未知的含抗體的樣品與標準抗原反應，所得的結果與標準的抗原、抗體反應結果比較，從而可以確定其中所含抗體成分及其滴度。

（二）試劑及材料

    1．巴比妥緩沖液  0.05mol/L pH8.2。

    2．1％瓊脂糖或優質瓊脂  以巴比妥緩沖液配制。

    3．pH7.2 PBS液

    4．抗原

    5．抗體

    6．電泳儀、玻板、吸管、滴管等。

（三）操作方法

1．取10cm×10cm的潔凈玻板，加1％溶化瓊脂糖10ml，鋪勻、冷凝。

2．打孔，在距陰極端2cm，玻板邊2.2cm處，打孔。

3．將一定濃度的抗原加入孔內，將抗原孔置于負極，電泳。電壓10V/cm，泳動1h。

4．電泳結束后，切除非抗原電泳部分的瓊脂（約6cm×10cm）。

5．取上述1％溶化的瓊脂糖10ml放入60℃水浴中，加入預熱的適當濃度的血清抗體

迅速混勻，鋪入切去的瓊脂部分。冷卻后，用不含抗體瓊脂密封切口。

    6．將玻板與原電泳方向成90度角放置，使泳動后的抗原凝膠置于負極，電泳。電壓為3V/cm，泳動10h~20h。

    7．漂洗、染色、脫色、烘干。

（四）結果判定

    與標準抗原抗體錐形沉淀線比較，判定和分析結果。

（五）注意事項

1．抗原抗體的最適稀釋度必須事先摸索好。

2．第二次電泳時間的長短以觀察錐形沉淀線的出現為準。電泳時間長短不一，短的可2h即出現。