動物受到病毒感染后，體內產生特異性中和抗體，并與相應的病毒粒子呈現特異性結合，因而阻止病毒對敏感細胞的吸附，或抑制其侵入，使病毒失去感染能力。中和試驗 (Neutralization Test)是以測定病毒的感染力為基礎，以比較病毒受免疫血清中和后的殘存感染力為依據，來判定免疫血清中和病毒的能力。
| 實驗材料 | 毒株標準血清 |
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| 試劑、試劑盒 | 牛血清Hanks 氏液瓊脂糖 |
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| 儀器、耗材 | 水浴鍋24孔板孵箱 |
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| 實驗步驟 | 一、試驗目的
血清分型。
二、實驗材料準備
1. 標本
出血熱恢復期病人血清
2. 材料
（1） 毒株 漢灘病毒標準株 76-118，漢城病毒標準株 Seoul；
（2）標準血清 兔抗漢灘病毒、漢城病毒血清；
（3）空斑減少中和試驗常用試劑。
三、步驟
1. 將待檢血清用牛血清Hanks 氏液稀釋成1：10，56℃滅活30分鐘；
2. 進一步2倍稀釋血清成1：20、1：40、1：80……，對照血清1：10稀釋；
3. 稀釋兩種病毒（在冰浴中進行）至含200 pfu/ml；
4. 各連續稀釋度血清分別與200 pfu/ml的兩種病毒液等量混合（各0.3 ml），置37℃中作用1小時（每15分鐘振蕩一次）；
5. 吸出各細胞培養孔中維持液；
6. 接種長滿單層的Vero-E6細胞（24孔板），每孔接種血清病毒混合液、標準血清對照及兩種病毒對照 ，每稀釋度兩孔，100 ul/孔。37℃吸附1小時，每隔15分鐘搖動一次；
7. 加第一層瓊脂糖覆蓋液（需冷置42℃左右），每孔1 ml，室溫下待凝固，細胞面朝上，置37℃5%CO2孵箱培養7-9天；
8. 加第二層含中性紅瓊脂糖覆蓋液，1 ml/孔，室溫下待凝固，細胞面朝上，置37℃5%CO2孵箱培養2-5天，從第二天開始觀察空斑數；
9. 抗體滴度的判定，以比病毒對照的空斑數中和或減少50%的血清最高稀釋度倒數判為待檢血清中和抗體滴度；
10. 型別判定：根據同一份血清與兩種病毒的反應滴度不同來區分，如果一份血清與漢灘病毒 （或漢城病毒）反應的抗體滴度高于與漢城病毒（漢灘病毒）的抗體滴度4倍或以上，即判為漢灘病毒型，反之則為漢城病毒型。兩者滴度相差無幾時，則不好分型。不足4倍時亦不能定型。
四、配方
1. 第一層瓊脂糖覆蓋液
2. 第二層瓊脂糖覆蓋液 基本上同第一層瓊脂糖覆蓋液，僅將滅活胎牛血清改為5 ml，另加中性紅溶液1 ml（333.0 ug/L中性紅鈉鹽Gibco）。 展開 |
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