乙醇脫氫酶的測定實驗——氧化反應測定

乙醇 + NAD+ ? 乙醛 + NADPH + H+

由于平衡易向正方向移動，逆反應的抑制必須加入堿性的 pH 試劑以及另一種試劑來捕捉乙醛，以便將產物從平衡中移走。

乙醇脫氫酶稀釋溶液

甘氨酸-二磷酸鈉溶液磷酸鉀乙醇NADBSA 溶液氨基脲

分光光度計

實驗所需「試劑」具體見「其他」

0.98 ml 實驗混合物

0.02 ml ADH 稀釋溶液

25℃ 時，于 340nm 處吸收值降低。NADH 的吸收系數 ε₃₄₀＝6.3×10³ l/（mol·cm）。

試劑：

75 mmol/L 甘氨酸-二磷酸鈉溶液 pH 9.0（10 g Na₄P₂O₇· 10 H₂O＋0.5 g 甘氨酸溶于 300 ml H₂O，用 1 mol/L HCl 調節至 pH 9.0）

0.1 mol/L 磷酸鉀，pH 7.5

乙醇，p.A.（Mr＝46.1，d＝0.81 g/ml）

0.1 mol/L NAD（0.633 g 溶于 10 ml 0.1mol/L 磷酸鉀，pH 7.5）

0.1mol/L 1，4-二硫代赤藻糖醇（DTE，Mr＝154.3，154 mg 溶于 10 ml 0.1 mol/L 磷酸鉀，pH 7.5）

0.1 g BSA 溶于 100 ml 0.1 mol/L磷酸鉀，pH 7.5（BSA 溶液）

2.2 mol/L 氨基脲（Mr＝11.5，2.5 g 氨基脲-HCl 溶于 10 ml 2mol/LNaOH，用 5mol/L NaOH 調節 pH 到 6.3～6.5）

ADH，稀釋同前